Biacore analysis of SN8 framework variants
| SN8 FW variant . | Murine framework residues present .  | Changes for stability in VL .  | CDR-H3 seq . | Bivalent binding fold, Kdvariant / Kdchimera . | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| VL .  | VH .  | |||||||||||||||
| 4 . | 47 . | 48 . | 67 . | 69 . | 71 . | 73 . | 75 . | 78 . | 80 . | 28 . | 29 . | 94 . | 95 . | |||
| SN8 graft | 71 | 73 | 78 | wt | 56 | |||||||||||
| All vernier | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 75 | 78 | 80 | wt | 1 | ||||
| 1 | 48 | 71 | 73 | 78 | wt | 9.4 | ||||||||||
| 2 | 47 | 71 | 73 | 78 | wt | 18 | ||||||||||
| 3 | 67 | 69 | 71 | 73 | 75 | 78 | 80 | wt | 5.5 | |||||||
| 4 | 69 | 71 | 73 | 75 | 78 | 80 | wt | 12 | ||||||||
| 5 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 75 | 78 | 80 | wt | 3.5 | ||||||
| 6 | 48 | 67 | 71 | 73 | 78 | wt | 7.6 | |||||||||
| 7 | 48 | 69 | 71 | 73 | 78 | wt | 3.5 | |||||||||
| 8 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | wt | 1.7 | ||||||||
| 9 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | 80 | wt | 1.8 | |||||||
| 10 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 75 | 78 | wt | NA | |||||||
| 11 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 75 | 78 | 80 | H3-10 | 0.6 | ||||||
| 12 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | H3-10 | 0.5 | ||||||||
| 13 | 47 | 48 | 69 | 71 | 73 | 78 | wt | 1.8 | ||||||||
| 14 | 4 | 48 | 69 | 71 | 73 | 78 | wt | 1.1 | ||||||||
| 15 | 4 | 47 | 48 | 69 | 71 | 73 | 78 | wt | 0.8 | |||||||
| 16 | 4 | 48 | 67 | 71 | 73 | 78 | wt | 1.6 | ||||||||
| 17 | 4 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | wt | 1.0 | |||||||
| 18 | 4 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | H3-10 | 0.4 | |||||||
| 19 | 4 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | S | E | H3-10 | NDB | |||||
| 20 | 4 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | S | N | H3-10 | NDB | |||||
| 21 | 4 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | E | E | H3-10 | NDB | |||||
| 22 | 4 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | E | N | H3-10 | NDB | |||||
| 23 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | S | E | H3-10 | 25 | ||||
| 24 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | S | N | H3-10 | NDB | ||||
| 25 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | E | E | H3-10 | NDB | ||||
| 26 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | E | N | H3-10 | NDB | ||||
| 27 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | H3-10 | |||||||
| 28 | 4 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | E | H3-10 | 0.8 | ||||||
| 29 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | N | H3-10 | Very weak | |||||||
| 30 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | A | H3-10 | 1.3 | |||||
| 31 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | S | H3-10 | 1.0 | |||||
| 32 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | S | H3-10 | 1.6 | |||||
| 33 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | A | H3-10 | Very weak | |||||
| 34 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | E | H3-10 | NDB | |||||
| SN8 FW variant . | Murine framework residues present .  | Changes for stability in VL .  | CDR-H3 seq . | Bivalent binding fold, Kdvariant / Kdchimera . | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| VL .  | VH .  | |||||||||||||||
| 4 . | 47 . | 48 . | 67 . | 69 . | 71 . | 73 . | 75 . | 78 . | 80 . | 28 . | 29 . | 94 . | 95 . | |||
| SN8 graft | 71 | 73 | 78 | wt | 56 | |||||||||||
| All vernier | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 75 | 78 | 80 | wt | 1 | ||||
| 1 | 48 | 71 | 73 | 78 | wt | 9.4 | ||||||||||
| 2 | 47 | 71 | 73 | 78 | wt | 18 | ||||||||||
| 3 | 67 | 69 | 71 | 73 | 75 | 78 | 80 | wt | 5.5 | |||||||
| 4 | 69 | 71 | 73 | 75 | 78 | 80 | wt | 12 | ||||||||
| 5 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 75 | 78 | 80 | wt | 3.5 | ||||||
| 6 | 48 | 67 | 71 | 73 | 78 | wt | 7.6 | |||||||||
| 7 | 48 | 69 | 71 | 73 | 78 | wt | 3.5 | |||||||||
| 8 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | wt | 1.7 | ||||||||
| 9 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | 80 | wt | 1.8 | |||||||
| 10 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 75 | 78 | wt | NA | |||||||
| 11 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 75 | 78 | 80 | H3-10 | 0.6 | ||||||
| 12 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | H3-10 | 0.5 | ||||||||
| 13 | 47 | 48 | 69 | 71 | 73 | 78 | wt | 1.8 | ||||||||
| 14 | 4 | 48 | 69 | 71 | 73 | 78 | wt | 1.1 | ||||||||
| 15 | 4 | 47 | 48 | 69 | 71 | 73 | 78 | wt | 0.8 | |||||||
| 16 | 4 | 48 | 67 | 71 | 73 | 78 | wt | 1.6 | ||||||||
| 17 | 4 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | wt | 1.0 | |||||||
| 18 | 4 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | H3-10 | 0.4 | |||||||
| 19 | 4 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | S | E | H3-10 | NDB | |||||
| 20 | 4 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | S | N | H3-10 | NDB | |||||
| 21 | 4 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | E | E | H3-10 | NDB | |||||
| 22 | 4 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | E | N | H3-10 | NDB | |||||
| 23 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | S | E | H3-10 | 25 | ||||
| 24 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | S | N | H3-10 | NDB | ||||
| 25 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | E | E | H3-10 | NDB | ||||
| 26 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | E | N | H3-10 | NDB | ||||
| 27 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | H3-10 | |||||||
| 28 | 4 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | E | H3-10 | 0.8 | ||||||
| 29 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | N | H3-10 | Very weak | |||||||
| 30 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | A | H3-10 | 1.3 | |||||
| 31 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | S | H3-10 | 1.0 | |||||
| 32 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | S | H3-10 | 1.6 | |||||
| 33 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | A | H3-10 | Very weak | |||||
| 34 | 4 | 47 | 48 | 67 | 69 | 71 | 73 | 78 | E | H3-10 | NDB | |||||
wt indicates wild type; N, asparagine; A, alanine; S, serine; E, glutamine; and NDB, no detectable binding.